Méthode 1 : Méthode d'extraction (La méthode actuellement utilisée dans mon pays ; elle donne une pureté inférieure mais offre des coûts de production inférieurs.)
Extraction de la solution d'ocytocine : prenez 100 g de poudre hypophysaire postérieure séchée et 30 g de poudre de quartz, placez-les dans un broyeur à boulets et ajoutez de l'eau distillée. Effectuez l’extraction quatre fois en utilisant cette même procédure. Les volumes d'eau distillée ajoutés pour chaque étape sont les suivants : 1,4 L pour les deux premières extractions, et 1,3 L pour les deux suivantes. Chaque extraction est réalisée pendant 45 minutes, suivie d'une centrifugation pour récupérer le liquide ; le résidu restant est ensuite soumis à une extraction supplémentaire. Les quatre extraits résultants sont combinés pour donner la solution d'ocytocine. En résumé : Poudre hypophysaire postérieure séchée [eau, broyeur à boulets] → Extrait d'ocytocine → Séparation chromatographique.
Prendre 1 500 g de zéolite synthétique pré-traitée, ajouter 20 L d'une solution d'acide acétique à 0,25 % et-après avoir agité-verser le mélange dans une colonne échangeuse d'ions-. Une fois que le niveau de la solution d’acide acétique est descendu jusqu’à 2 à 3 cm au-dessus de la surface du lit de zéolite, introduire immédiatement l’extrait d’ocytocine. Maintenir un débit approprié et collecter l'éluat blanc et trouble résultant (cette fraction contient principalement de l'ocytocine ; puisque l'ocytocine a un point isoélectrique [pI] de 7,7- alors que la vasopressine a un pI de 10,9 - la vasopressine forme facilement des ions positifs et est ainsi adsorbée sur la colonne). Dès que le niveau liquide de l'extrait descend à la surface du lit de zéolite, ajouter immédiatement de l'eau distillée et continuer à collecter l'éluat trouble jusqu'à ce que l'écoulement cesse. Ajuster le pH de l’éluat trouble collecté à 3,5 à l’aide d’acide acétique glacial. Chauffez rapidement la solution dans un bain-marie à 95 degrés, maintenez cette température pendant 3 minutes, puis refroidissez rapidement la solution et réfrigérez-la toute la nuit. En résumé : Extrait d'ocytocine [HAc, colonne de zéolite synthétique] → Éluat trouble [HAc, chauffage] → Solution séparée → Adsorption et élution. Le lendemain, filtrer la solution réfrigérée. Au filtrat, ajouter une bouillie de bentonite à 10 % tout en remuant (en ajoutant 3 mL de bouillie pour 100 mL de filtrat). Continuez à remuer pendant 1 heure pour faciliter l'adsorption, puis centrifugez le mélange. Testez le liquide surnageant à l’aide d’une solution réactive d’acide sulfosalicylique ; l'absence de précipité indique que le processus d'adsorption est terminé. Si l'adsorption est incomplète, répétez le processus de traitement à la bentonite ; ensuite, combiner les précipités de bentonite obtenus à partir des deux étapes d'adsorption. La bentonite est éluée quatre fois en utilisant de l'acide acétique à 1 % (avec des volumes de 1,6 L, 1,4 L, 1,2 L et 0,8 L, respectivement). Pour chaque éluat, du *tert*-butyltrichlorure est ajouté une fois la solution chauffée à 80 degrés ; la température est ensuite augmentée à 95 degrés, rapidement refroidie à 25 degrés et filtrée ou centrifugée. Les quatre filtrats résultants sont combinés pour déterminer la puissance et la limite de vasopressine. Le déroulement du processus est le suivant : Solution réfrigérée [Filtration] → Filtrat [Boue de bentonite] → Adsorbat [1 % HAc] → Éluat. Préparation de l’injection d’ocytocine :
La solution d'ocytocine testée, ayant répondu aux normes de qualité, est diluée à une concentration de 5 U/mL ou 10 U/mL. Il est ensuite filtré à travers un entonnoir en verre fritté No. 4 ou No. 5, versé dans des ampoules et stérilisé à l'aide d'un courant de vapeur à 100 degrés pendant 30 minutes pour donner le produit final. Le déroulement du processus est le suivant : Solution d'ocytocine (test approuvé) [Filtration, remplissage, stérilisation] → Injection d'ocytocine.
Régénération de la zéolite synthétique : La zéolite synthétique est lavée deux fois avec de l'eau distillée. Ensuite, 1,5 L d'eau (calculé sur la base de 500 g de zéolite) et 150 g de chlorure de sodium sont ajoutés et le mélange est agité pendant 2 heures pour éliminer la vasopressine. La zéolite est ensuite lavée avec de l'eau distillée jusqu'à ce qu'il ne reste plus d'ions chlorure. Une quantité appropriée d'eau est ajoutée et le pH est ajusté à 9 à l'aide de soude ; le mélange est agité pendant 30 minutes, après quoi le surnageant est décanté. La zéolite est lavée avec de l'eau distillée, le pH est ajusté entre 5,5 et 6 à l'aide d'acide sulfurique et elle est à nouveau lavée avec de l'eau jusqu'à ce qu'elle soit presque neutre. Il est ensuite filtré pour éliminer l'excès d'eau et séché à 105 degrés pour une utilisation ultérieure. Avant utilisation, une quantité appropriée d'eau est ajoutée et le pH est ajusté à l'aide d'acide acétique glacial tout en remuant pour permettre le trempage. Préparation d'une boue de bentonite à 10 % : la bentonite et l'eau sont mélangées dans un rapport masse-sur-volume de 1:10. Le mélange est broyé pendant environ 1 heure, temps pendant lequel de l'acide acétique est ajouté pour maintenir un pH stable de 3,5. La bouillie obtenue est ensuite conservée au réfrigérateur pour une utilisation ultérieure. Méthode 2 : Synthèse chimique. Tout d'abord, l'heptapeptide amide (segments 3 à 9) est synthétisé à partir de l'ester de benzyloxycarbonyl-leucine *p*-nitrophényle ; ensuite, l'azoture de benzyloxycarbonyl-S-benzylcystéine-tyrosine (segments 1–2) est synthétisé ; et dans la troisième étape, l'ocytocine est synthétisée.